第1章 以黑果枸杞茎、叶为外植体的组培及其体细胞无性系变异
1.1 材料与方法
1.1.1 试验材料
1.1.2 试验方法
1.1.3 数据分析
1.2 结果与分析
1.2.1 黑果枸杞愈伤组织、不定芽及丛生芽的诱导
1.2.2 MSAP分析
1.3 讨论与结论
1.3.1 黑果枸杞微繁殖
1.3.2 DNA甲基化变异与位点特异性MSAP
1.3.3 结论
第2章 以黑果枸杞未开放花朵为外植体的组培及玻璃化去除
2.1 材料与方法
2.1.1 试验材料
2.1.2 无菌材料的获取
2.1.3 外植体诱导脱分化和再分化
2.1.4 饥饿干燥结合AgNO3去除玻璃化
2.1.5 RNA—Seq分析
2.1.6 qRT-PCR
2.1.7 透射电子显微镜观察
2.1.8 激光共聚焦显微镜观测及叶绿素含量测定
2.1.9 植物激素代谢组分析
2.1.10 总可溶性蛋白的测定
2.1.11 数据统计分析
2.2 结果与分析
2.2.1 不同PGR组合对脱分化和再分化的影响
2.2.2 饥饿干燥结合AgNO3处理去除芽丛玻璃化
2.2.3 RNA—Seq分析
2.2.4 qRT-PCR验证RNA-Seq结果可靠
2.2.5 黑果枸杞解除玻璃化叶片叶绿体结构恢复
2.2.6 黑果枸杞解除玻璃化叶片叶绿素含量升高
2.2.7 黑果枸杞解除玻璃化叶片各类植物激素含量变化
2.2.8 黑果枸杞解除玻璃化叶片总可溶性蛋白含量升高
2.3 讨论与结论
2.3.1 讨论
2.3.2 结论
第3章 蔗糖促进黑果枸杞组培无性系枝刺发生
3.1 材料与方法
3.1.1 试验材料
3.1.2 黑果枸杞枝刺的发育观察
3.1.3 RNA—Seq
3.1.4 qRT-PCR验证
3.1.5 内源糖含量测定
3.1.6 外源蔗糖处理黑果枸杞无刺植株
3.1.7 非代谢性蔗糖类似物和渗透压调节剂处理黑果枸杞无刺植株
3.1.8 摘叶处理黑果枸杞有刺植株
3.1.9 统计分析
3.2 结果与分析
3.2.1 黑果枸杞刺原基／刺的发育过程
3.2.2 RNA-Seq分析
3.2.3 qRT-PCR验证RNA-Seq结果可靠
3.2.4 海藻糖-6-磷酸(176P)和蔗糖含量
3.2.5 外源蔗糖促进可见枝刺发生／发育
3.2.6 非代谢性蔗糖类似物促进可见枝刺发生／发育
3.2.7 摘叶处理抑制可见枝刺的发生，发育
3.3 讨论和结论
3.3.1 讨论
3.3.2 结论
第4章 蔗糖促进黑果枸杞组培无性系枝刺发生初理探索
4.1 材料与方法
4.1.1 试验材料
4.1.2 喷施外源suc和减少内源Suc处理
4.1.3 RNA-Seq分析
4.1.4 RT-qPCR
4.1.5 数据统计分析
4.2 结果与分析
4.2.1 增施外源和减少内源Suc处理后刺表型变化
4.2.2 RNA-seq建库、组装及Unigene功能注释
4.2.3 差异表达分析
4.2.4 RT—qPCR验证RNA-seq结果可靠
4.3 讨论和结论
4.3.1 讨论
4.3.2 结论
第5章 生长素IAA抑制黑果枸杞组培无性系枝刺发生机理探索
5.1 材料与方法
5.1.1 试验材料
5.1.2 内源激素含量测定
5.1.3 生长素IAA处理有刺枝条
5.1.4 生长素拮抗剂PcIB处理无刺枝条
5.1.5 RNA-Seq
5.1.6 RT-qPCR
5.1.7 统计分析
5.2 结果与分析
5.2.1 内源激素含量
5.2.2 外源IAA和PCIB对枝刺发生的影响
5.2.3 黑果枸杞RNA—Seq
5.2.4 RT-qPCR
5.3 讨论和结论
5.3.1 讨论
5.3.2 结论
第6章 基于稳定遗传转化探索LrSUS对黑果枸杞枝刺发生的影响
6.1 材料与方法
6.1.1 植物材料
6.1.2 LrSUS的克隆和分析
6.1.3 载体构建
6.1.4 农杆菌介导的黑果枸杞稳定遗传转化
6.1.5 转化植株DNA提取与鉴定
6.1.6 成功转化植株LrSUS因表达分析
6.1.7 瓶内稳定转化植株表型测定
6.1.8 稳定转化植株移栽及表型测定
6.1.9 超表达植株蔗糖合酶(SUS)活性测定
6.1.10 超表达植株糖含量测定
6.1.11 超表达植株光合参数测定
6.1.12 RNA—Seq分析
6.1.13 数据统计分析
6.2 结果
6.2.1 LrSUS基因的克隆及序列分析
6.2.2 农杆菌介导黑果枸杞稳定遗传转化
6.2.3 稳定转化植株的DNA鉴定
6.2.4 稳定转化植株LrSUS表达检测
6.2.5 移栽前后稳定转化植株的表型变化
6.2.6 超表达植株蔗糖合酶总活性无显著变化
6.2.7 LrSUS超表达植株各类糖含量及光合指标的变化
6.2.8 RNA—Seq揭示超表达和对照植株之间的DEG
6.3 讨论和结论
6.3.1 讨论
6.3.2 结论
参考文献
致谢
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