对其他发育期的疟原虫几乎没有保护效果,且各期诱导机体产生的免疫反应不同。有研究人员推测,疟原虫可能对机体免疫系统有损害,可能导致多克隆B细胞的激活和免疫抑制,诱导记忆细胞的凋亡,引起树突状细胞功能的改变,抑制其成熟,降低被活化T细胞的数量。
2.缺乏有效的动物模型和佐剂
鼠模型常用来研究宿主与疟原虫的相互作用及免疫机制,但鼠疟原虫不同于人疟原虫,目前研究的鼠体内免疫反应机制多数可能与人类无关。恒河猴模型现用来评估候选抗原的免疫原性及保护作用,但由于恒河猴与人存在许多差别,一些在人体保护作用弱的候选疫苗可能被用于临床试验,而一些保护作用强的有效抗原却可能被忽视。另外令人担忧的是,迄今为止,疟原虫疫苗佐剂的种类十分有限,且在维持高效的抗体水平方面具有局限性。
3.生活史与宿主的交互作用复杂及存在多种疟原虫同时感染
疟原虫的生活史具有多期性,其在蚊体内的免疫逃避机制仍不明确。在红外期,只要有少数成熟子孢子进入人体,即可在肝细胞内大量增殖。在红内期,人们推测有多种疟原虫蛋白参与入侵过程。同种疟原虫各期抗原不同,不同种群的抗原也不同,抗原成分具有多态性。对于部分疟原虫表面抗原,仅在机体免疫反应的压力下才表达,这些潜在的候选抗原就为体外疫苗的研制带来了很大的困难。
Bruce等分析了新几内亚被感染但无症状的儿童体内的几种疟原虫,发现不同种疟原虫的种群可以依次达到高峰。该研究提示在疟原虫高发地区,人体和动物可能同时感染几种疟原虫,这样一种只针对某一种疟原虫的疫苗不但没有效果,反而可能给其他种疟原虫提供更快、更多的繁殖机会。所以推测今后疫苗的发展方向不仅是多价多期且可能是多种群的复合疫苗。
总之,关于抗疟原虫感染的疫苗,临床前期的研究工作已揭示了很多具有希望的抗疟原虫的候选抗原,对于这些候选抗原来说,要最终进入临床应用还有一个漫长的过程,期间有许多需要克服和解决的问题,如蛋白质的表达量和质量等。重组蛋白的表达产量和纯化流程是决定疫苗成本的一个重要因子,只有降低疫苗成本,才能使疫苗在发展中国家的疟原虫流行区得到推广应用,高的表达量可简化蛋白质的纯化流程和提高蛋白质的纯度。表达蛋白的均一性体现了蛋白质的质量,也是抗原蛋白能否进入临床应用的关键所在。恶性疟原虫很多候选抗原的保护作用是依赖于二硫键的,如果表达的重组蛋白不能全部形成正确的二硫键配对,也就得不到均一的蛋白质,其中就含有免疫无效的蛋白质,生产中任何微小的条件改变都有可能使每一生产批次的蛋白质形成差异,而不均一的蛋白质可造成免疫效果的不均一性。
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