本书选择miR-122高表达的Huh7细胞系作为研究模型,应用Real-timePCR方法检测HBV感染的Huh7细胞中细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)的表达水平,并通过SOCS3的过表达和敲除实验检测SOCS3在IFN抗HBV过程中的作用;通过miR-122过表达和miR-122抑制剂封闭实验,用Real-time PCR和Western blotting方法检测miR -122对SOCS3基因转录及翻译的影响;应用RNAhybrid软件预测miR-122与SOCS3mRNA中的靶位点;利用定点突变技术获得SOCS3mRNA靶位点突变型真核表达质粒,用荧光显微镜、荧光光谱分析仪和Western blotting方法确定miR-122在SOCS3 mRNA中的靶位点;在HBV转染的Huh7细胞中,通过升高或降低miR-122的表达,检测miR-122对内源性IFN-α(聚乙二醇化干扰素-α)、IFN-β的诱导作用及其与IFN诱导剂诱导内源性IFN的相关性,以及诱导的IFN对HBV的抑制作用。
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