本书是《色谱技术丛书》中专门介绍亲和色谱方法的分册。书中对亲和色谱方法的特点、适用范围、亲和固定相的制备方法及实验技术作了较全面的介绍。由载体、间隔臂和配位体制作的亲和固定相可与生物分子生成具有“锁匙”结构的络合物，其在生物化学、分子生物学和生物工程下游技术中获得广泛的应用。
　　本书适用于生物化学、分子生物学、药学、分析化学等专业师生选作教材或参考书，也可供从事制备液相色谱、生物制品或天然产物纯化、传感器制作、微流路芯片或生物芯片制作的工程技术人员作为学习参考材料。

　　第一章  亲和色谱法基础
　　第一节  概述
　　亲和色谱（affnity chromatography，AC）是利用生物分子，特别是生物大分子与亲和色谱固定相表面配位体之间，存在的生物学和生物化学过程的特效性亲和吸附作用，来进行选择性分离生物分子的分离方法。
　　生物大分子（肽、蛋白质、核酸等）的一个共同特性，是它们具有以特有的高效方式去识别或键合到其他分子上的能力，这就使得所有的生物大分子，可借助亲和作用过程来进行分离和纯化。
　　亲和色谱的固定相可与生物分子产生可逆的生物特异性的亲和吸附作用，经过选择性或特效性洗脱，可实现对不同分子量的生物活性分子的分离和分析。
　　至今，亲和色谱已在生物化学、分子生物学、基因组学、蛋白质组学、生物工程、临床医学、新型高效药物研究中，成为常规的分离、分析和制备的有效工具，并且在生物大分子的结构、功能研究中，成为一种普遍采用的方法。
　　一、锁匙结构络合物的形成
　　亲和色谱固定相上键合的配位体与被分离的生物活性目标分子之间的相互作用，可用锁匙结构络合物10ck—and—key structural complex）的形成来表示，如图1—1所示。
　　生物活性目标分子与配位体之间存在着特效的、可逆性的相互作用，这种相互作用的差异，才使不同种类的生物分子获得分离，它涉及分子间相互作用的范德华力、疏水作用力、静电吸引力、络合作用力以及空间位阻效应等多种因素。
　　亲和色谱法的突出特点是可对天然生物活性物质进行高特效性的分离和纯化，具有高的浓缩效应，可从大量样品基体中分离、纯化出所希望获取的少量生物活性物质。

第一章 亲和色谱法基础1
第一节 概述1
一、锁匙结构络合物的形成1
二、亲和色谱和液相色谱2
三、高效液相亲和色谱3
四、亲和色谱方法的分类4
五、亲和色谱发展史4

第二节 亲和色谱法的基本理论7
一、锁匙结构亲和吸附络合物的化学平衡8
二、亲和吸附等温线、吸附速度和吸附动力学方程式11
三、亲和键合动力学14
四、亲和色谱的质量平衡数学模型15
五、“分裂峰”效应的研究19
参考文献23

第二章 流动相25
第一节 影响亲和色谱洗脱的各种因素25
一、锁匙络合物的离解常数25
二、配位体的浓度26
三、空间阻碍作用27
四、亲和固定相的吸附容量28
五、平衡时间29
六、温度效应30

第二节 缓冲溶液流动相的组成30
一、常用的酸、碱缓冲溶液30
二、用于生物化学研究的氢离子缓冲物32

第三节 洗脱方法41
一、非选择性洗脱法41
二、特效性洗脱法（或称生物选择性洗脱法）42
三、特殊洗脱方法43
参考文献44

第三章 固定相（一）45
第一节 亲和色谱固定相的制备方法45
一、亲和色谱固定相的组成45
二、固定化反应及其特点46
三、在固定化反应中使用的分析技术46

第二节 载体材料的分类及特性49
一、描述载体材料的基本特性参数50
二、无机氧化物载体材料51
三、聚合物载体材料54
四、无机氧化物、聚合物载体的性能比较61
五、复合物载体材料63
六、磁性载体材料66
参考文献67

第四章 固定相（二）70
第一节 载体材料的活化70
一、无机氧化物的偶联反应70
二、天然有机高聚物的活化反应75
三、合成有机聚合物的功能化反应81

第二节 间隔臂86
一、间隔臂在亲和色谱固定相中的特殊作用86
二、疏水性直链型间隔臂91
三、亲水性直链型间隔臂94
四、星形辐射 树枝状间隔臂95

第三节 配位体97
一、配位体的类型97
二、配位体的键合量99
三、配位体的键合方式100
参考文献102

第五章 生物特效配位体（一）104
第一节 核碱、核苷、核苷酸、寡聚核苷酸、核酸（RNA、DNA）104
一、核碱104
二、核苷108
三、核苷酸108
四、寡聚核苷酸、核酸及其碎片111

第二节 氨基酸、肽、酶和蛋白质121
一、氨基酸121
二、肽123
三、酶和蛋白质127
参考文献138

第六章 生物特效配位体（二）140
第一节 维生素及辅酶140
第二节 外源凝集素144
一、豆类外源凝集素 琼脂糖，SiO2亲和固定相145
二、蓖麻凝集素 琼脂糖亲和固定相146
三、三重外源凝集素 琼脂糖亲和固定相147
四、在微流路芯片上豌豆凝集素（PSA） P（GMA EDMA）共聚物整体亲和柱的制备149

第三节 糖类150
一、肝素 琼脂糖，SiO2亲和固定相150
二、甘露聚糖 P（GMA EDMA）共聚物整体毛细管亲和柱的制备151

第四节 抗原和抗体153
一、抗原及其性质153
二、抗体及其性质154
三、抗体与抗原相互作用的特点155
四、免疫亲和色谱固定相的制备156
参考文献162

第七章 生物特效配位体（三）165
第一节 亲和素 生物素165
一、亲和素和链亲和素的重要性质165
二、亲和素 生物素技术166
三、生物素酰化衍生物（或结合体）的生成167
四、亲和素 固相载体共轭探针的形成167
五、亲和素 生物素技术在亲和色谱的应用170

第二节 激素175
一、胰岛素 琼脂糖亲和固定相175
二、促肾上腺皮质激素 琼脂糖亲和固定相177
三、雌二醇 琼脂糖亲和固定相177
四、皮质醇 琼脂糖亲和固定相178

第三节 生物细胞、生物分子组合体和微生物178
一、生物细胞和生物分子组合体179
二、微生物细胞181
参考文献182

第八章 染料配位体184
第一节 三嗪活性染料的性质184
一、三嗪染料的组成184
二、三嗪染料对生物分子的特效亲和作用186

第二节 染料配位亲和固定相的制备及分析应用187
一、多糖基体亲和固定相187
二、全多孔（或非多孔）硅胶基体亲和固定相192
三、聚合物基体亲和固定相195
四、 Cibacron Blue F3G A开管毛细管亲和柱202
参考文献202

第九章 定位金属离子配位体204
第一节 概述204
一、定位金属离子的特性204
二、螯合官能团或螯合剂的特性205
三、蛋白质的吸附和解吸206
四、IMAC方法的特点207

第二节 IMAC固定相的制备方法及在生物分子分离、纯化中的应用207
一、亚氨基二乙酸（IDA）207
二、次氨基三乙酸（氨三乙酸，NTA）221
三、亚氨基二乙醛肟（IDAO）221
四、乙二胺（ED）222
五、三（羧甲基）乙二胺（TED）223
六、乙二胺 N，N′ 二乙酸（EDDA）224
七、丙二胺四乙酸（PDTA）225
八、 8 羟基喹啉225
参考文献228

第十章 包合配合物配位体230
第一节 猹不泛
一、 猹不泛奶匦
二、猹睠D包合固定相的制备及在生物分子分离、纯化中的应用232

第二节 冠醚和穴醚242
一、冠醚和穴醚的特性242
二、冠醚包合固定相的制备243

第三节 杯芳烃245
一、杯芳烃的特性246
二、杯芳烃包合固定相的制备247
参考文献252

第十一章 电荷转移配位体254
第一节 电子给予 接受络合物254
一、电子给予 接受络合物的特性254
二、芳烃、多环芳烃配位体电荷转移亲和固定相255

第二节 电子给予配位体电荷转移固定相256
一、苯基烯丙基醚 硅胶电荷转移固定相256
二、2 氯喹唑啉（CQZ） 硅胶电荷转移固定相256
三、8 羟基喹啉（8 HQ） 硅胶电荷转移固定相256
四、吖啶黄素 葡聚糖电荷转移固定相258

第三节 电子接受配位体电荷转移固定相258
一、二硝基苯（DNP） 葡聚糖（硅胶）电荷转移固定相258
二、五氯巯基酚（PCP） 葡聚糖电荷转移固定相260
三、 4氨基 1，8 萘二甲酰亚胺（ANA） 葡聚糖电荷转移固定相260
四、 2，3 二氰基 5，6 二氯代苯醌（DCBQ） 葡聚糖电荷转移固定相261
五、四氯邻苯二甲酰亚胺（TCPI） 硅胶电荷转移固定相261
六、二硝基苯 甘氨酸（DNP Gly） P（S DVB）或PMA电荷转移固定相261

第四节 卟啉配位体电荷转移固定相263
一、卟啉及其衍生物263
二、卟啉电荷转移固定相的制备及分析应用264

第五节 酞菁配位体电荷转移固定相271
一、酞菁及其衍生物271
二、四磺酸化铜酞菁 硅胶固定相272
三、其他金属离子酞菁衍生物的应用274
参考文献275

第十二章 共价、分子印迹和疏水作用配位体277
第一节 共价配位体277
一、常用的共价配位体277
二、共价配位体亲和固定相的制备277

第二节 分子印迹（模板）配位体285
一、分子印迹聚合物的特性285
二、共价键合分子印迹聚合物287
三、非共价键合分子印迹聚合物289
四、苯丙氨酰苯胺 P［AA（或MAA） EDMA］共聚物分子印迹整体柱292
五、表面涂渍分子印迹聚合物的固定相293

第三节 疏水作用配位体298
一、疏水作用原理298
二、疏水作用亲和固定相的制备302
参考文献305

第十三章 亲和色谱法实验技术及其进展307
第一节 亲和色谱法实验技术307
一、亲和色谱固定相的制备技术307
二、亲和色谱分析操作技术309
三、生物样品的保存和制备313

第二节 亲和色谱方法的进展314
一、亲和色谱分离材料的设计315
二、新型高选择性药物的研制319
三、亲和色谱的发展前景320
参考文献323

附录325
Ⅰ活化和偶联配位体到HPLAC载体的反应条件325
Ⅱ亲和色谱固定相制备中常用的偶联剂、活化剂327