第1章；细胞膜和完整细胞的
     放射性配体结合分析　David B．Bylund，Jean D．Deupree。Myron L．Toews摘要
     在G蛋白偶联受体的研究中，放射性配体结合分析是一个相对简单而有效的工具。放射性配体结合分析包括三种基本实验：（1）饱和实验，用于测定放射性配体对受体的亲和力以及结合位点的密度；（2）抑制实验，用于测定未标记放射性核素的竞争配体与受体的亲和力；（3）动力学实验，用于测定放射性配体与受体的结合速率常数和解离速率常数。本章将详细介绍用以检测细胞膜和完整细胞的G蛋白偶联受体的经典的放射性配体结合分析方法，以及对实验数据分析的具体过程。
     关键词
     亲和性（affinity），分析，结合，竞争，G蛋白偶联受体，抑制，完整细胞，动力学，非特异性结合，放射性配体，放射性受体，速率常数，受体，饱和。
     1  引言
     在G蛋白偶联受体（G-protein-coupled receptor，GPCR）的研究中，放射性配体结合分析（radioligand—binding assay）是相对简单而有效的方法。它可用于测定多种药物对受体的亲和力，表征受体数目和亚细胞定位的调节性变化。因此，该分析方法被众多学科的研究者广泛采用（也经常被误用）。本章主要讨论用于组织和细胞系的膜制品以及完整细胞的放射性配体结合分析方法。当然，类似技术也可用于研究可溶性受体、组织切片上的受体（受体放射自显影术）或整体动物上的受体。
     放射性配体结合实验包括三种基本类型：（1）饱和实验，用于测定放射性配体对受体的亲和力（K）以及结合位点的密度（Bmax）；（2）抑制实验，用于测定未标记的竞争配体与受体的亲和力（Ki）；（3）动力学实验，用于测定放射性配体与受体的结合速率常数（K+1）和解离速率常数（k-1）。本章将对在G蛋白偶联受体研究中经典的放射性配体结合分析进行介绍。
     1．1饱和实验
     饱和实验（saturation experiment）常用于确定受体密度（受体的数目）在发育或实验干预（如药物治疗）时的变化。保持受体数不变而改变放射f生配体浓度可得到饱和曲线。从该实验中可估计受体最大结合量（Bmax）和受体对放射性配体的解离常数（Ka）。饱和实验的结果以结合配体数（与受体结合的放射性配体的浓度）为y轴，游离配体数（未与受体结合的放射性配体的浓度）为x轴作图。如图1—1所示，当放射性配体浓度增大时结合配体数逐渐增加，当达到某一点以后，再增多放射性配体量也不引起结合配体数的显著增加。所得图形为一直角双曲线，即饱和曲线。Bmax为随放射性配体浓度增加所对应的最大结合数，即饱和曲线的最高趋近点所对应的y值，亦可代表所研究组织中的受体密度。Kd为占据受体50％结合位点时的配体浓度。
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