第一章 适合重组蛋白表达的哺乳动物细胞
第一节 CHO细胞表达系统
一、CHO细胞历史与分类
二、CHO细胞表达系统的优点
三、CHO细胞培养
第二节 HEK293细胞表达系统
一、HEK293细胞的分类与优点
二、HEK293细胞培养与鉴定
第三节 其他哺乳动物细胞
一、人源化细胞系
二、非人源化细胞系
参考文献
第二章 基因工程
第一节 基因工程简介
一、基因工程概念
二、基因工程的发展史
三、基因工程的应用和基因工程医药的前景
第二节 哺乳动物细胞基因工程
一、目的基因获取
二、载体系统
三、DNA的体外重组
四、重组DNA的转化
五、重组DNA的筛选与鉴定
六、目的基因的表达
参考文献
第三章 载体工程
第一节 表达载体元件的优化
一、启动子
二、增强子
三、多聚腺苷酸尾
四、内含子
五、内部核糖体进入位点和F2A
六、选择标记
七、翻译与分泌优化
第二节 染色质调控元件
一、核基质附着区
二、遍在染色质开放元件
三、绝缘子
四、稳定抗阻遏元件
第三节 靶基因整合
一、位点特异性重组系统
二、基于核酸酶和DNA修复途径的位点特异性整合
第四节 非靶向转基因整合
一、转座子
二、慢病毒载体
参考文献
第四章 转染与筛选
第一节 细胞转染
一、细胞转染的原理
二、细胞转染方法
第二节 细胞转染后的筛选
一、瞬时转染与稳定转染
二、稳定细胞系的筛选
三、CHO细胞加压筛选
四、HEK293细胞表达系统
参考文献
第五章 基因组编辑与细胞工程
第一节 基因组编辑技术
一、概念
二、常用的基因组编辑技术
第二节 CRISPR/Cas9技术在哺乳动物细胞中的应用
一、基因的破坏
二、位点特异性基因整合
三、基因激活或抑制
四、基因组水平目的基因敲除的筛选
五、基因编辑应用实验设计
六、脱靶分析
第三节 CHO细胞工程
一、目的基因
二、细胞工程常用技术
三、抗凋亡工程
四、代谢工程调控
五、细胞骨架与细胞周期工程
六、蛋白质翻译后修饰工程
七、蛋白质合成工程
参考文献
第六章 动物细胞培养基及其优化
第一节 细胞培养基
一、细胞培养基简介
二、动物细胞培养基的分类
三、细胞培养基的相关政策与标准
四、细胞培养基的主要成分
五、细胞培养基的理化性质
六、细胞培养基的灭菌及储存
七、细胞培养基的配制
第二节 CHO细胞培养基
一、CHO细胞培养基概况
二、CHO细胞无血清培养基的成分组成及优化
第三节 其他细胞系培养基
一、HEK293细胞系培养基
二、HeLa细胞系培养基
参考文献
第七章 培养工艺与大规模培养
第一节 动物细胞大规模培养参数
一、温度
二、通气
三、pH
四、渗透压
五、搅拌
六、防止污染
第二节 动物细胞大规模培养
一、动物细胞大规模培养反应器
二、动物细胞大规模培养操作方式
参考文献
第八章 哺乳动物细胞重组蛋白的分离及纯化
第一节 重组蛋白样品的预处理
一、透析法
二、超滤法
三、冷冻干燥法
四、双水相萃取法
第二节 重组蛋白分离纯化的原理及方法
一、蛋白质沉淀
二、亲和色谱
三、高效液相色谱
四、分子筛色谱
五、离子交换色谱
六、其他纯化技术
参考文献
第九章 重组蛋白分析与鉴定
第一节 重组蛋白理化性质分析
一、重组蛋白的电荷异质性分析
二、重组蛋白分子量测定
三、重组蛋白的其他性质
第二节 重组蛋白定量分析技术
一、标准定量法
二、比色分析法
三、紫外吸收法
四、ELISA测定
五、蛋白质印迹法
第三节 空间结构分析
一、蛋白质的空间结构
二、X射线衍射晶体分析
三、核磁共振
四、生物质谱技术
参考文献
第十章 重组蛋白糖基化修饰与控制
第一节 糖基化修饰类型及其作用
一、糖基化及其修饰类型
二、糖基化修饰的生物学作用
第二节 重组蛋白糖基化工程及其应用
一、重组蛋白糖基化工程
二、重组蛋白糖基化修饰改造策略
三、重组蛋白糖基化工程的应用
第三节 重组蛋白糖基化控制
一、基因组学水平
二、系统生物学水平
三、质量控制与评价
参考文献
第十一章 重组抗体质量控制
第一节 重组抗体生产细胞的质量控制
一、建构工程细胞和细胞库
二、细胞质控
第二节 重组抗体的质控标准物质
一、理化对照品的结构验证
二、活性标准品的协作标定
第三节 重组抗体生产产品的质量控制
一、产品质量一致性分析
二、生物学活性测定
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