第三节 显示细胞和组织成分、结构的方法
一、光学显微镜技术
（一）一般光学显微镜技术
一般光学显微镜技术又称普通光镜技术，石蜡切片术是最经典、最常用的技术，其基本程序为取材、固定、脱水、包理、切片、染色、封片。石蜡切片最常用的染色法是苏木精一伊红染色法。简称H—E染色法。苏木精为碱性染液，主要使细胞核中的染色质与胞质中的核糖体染成紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。组织结构易与碱性染料亲和的染色特性称为嗜碱性；易与酸性染料亲和的染色特性称为嗜酸性；若与两种染料的亲和力都不强，则称中性。若用某种染料染色，染出来的颜色与染料本身的颜色不一致．则称为异染性。
除石蜡切片外，在制作较大组织块（如眼球、脑）的切片时，常用火棉胶包埋．对要进行组织化学或免疫组织化学反应的标本，常用冰冻切片，以保存蛋白质（包括酶）的结构和活性．此外．尚有将血液直接涂于玻片上的涂片法；将疏松结缔组织或肠系膜等撕成薄片铺在载玻片上的铺片法：将骨和牙等硬组织磨为薄片的磨片法。
为特异性地显示某种细胞、细胞外基质成分或细胞内的某种结构，常需采用特殊染色。如对神经组织与网状纤维的显示等常用硝酸银染色（银染）；对多糖类物质常用高碘酸一Schiff夫反应染色等；对脂类物质常用苏丹类染料或四氧化锇进行脂肪染色；对弹性纤维常用醛品红等染色（弹性染色）。另外，可利用某些细胞的生物活性进行染色，如利用巨噬细胞有很强的吞噬能力而进行的活体染色。
（二）特殊光学显微镜技术
从研究对象的特性与研究目的出发．应用带特殊装置显微镜的技术，统称为特殊光学显微镜技术。
1．荧光显微镜用于观察在组织化学与免疫组织化学中使用荧光素染色或作为标记物的标本以及某些有白发荧光的标本，使研究者通过观察荧光的分布与强弱来了解组织的情况．荧光显微镜用得最多的是在免疫组织化学中，首先用荧光素标记抗体，再利用抗原与抗体结合的性质，检测抗原的存在与分布。
2．相差显微镜用于观察组织培养中活细胞的形态结构，可将活细胞不同厚度及细胞内各种结构对光产生的不同折射转换为光密度差异（明暗差），从而使镜下结构反差明显，影像清晰。
3．暗视野显微镜用于观察微小颗粒的运动，如细胞胞质内的线粒体以及液体介质中的细菌、酵母、真菌等的运动。暗视野显微镜极大地提高了分辨率，普通光镜的最大分辨率为0．2um，暗视野显微镜可达0．004um．
4．激光共聚焦扫描显微镜（CLSM）CLSM是一种高光敏度与高分辨率的仪器，可对细胞的多种结构在亚细胞水平进行高效快速的定位与定性测定。配以微机图像处理系统，即可对细晌汫行三维结构的图像分析。
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