有高数值孔径(NA)的物镜一般用于单分子监测,一个大的收集角度可以有效检测到来自随意取向的荧光团的光子。对于溶液中的μs-ALEX,油镜头(NA 1.3~1.45)提供最大的收集效率,但是工作距离有限(溶液中0~20μm)。高数值孔径的水镜(NA=1.2)提供大的工作距离(水中达到50μm)并减少相差(接近理想的点扩散函数)。物镜一般从显微镜供应商处订购以确保兼容。
二色分光器
分光器的目的是让激发光通过物镜的后孔径到样品上并把发射光传递到检测路径。对于ALEX的应用,商业途径得到的多色分光器(或者AOTF,见前文,调制部分,以及下文,毫秒级ALEX:在毫秒尺度监测构象的动态)用来保证几条激光同时被反射和传递。
显微镜台和温度控制
溶液中ALEX实验不需要纳米方位台和带马达的台子。一个xy方向的机械显微镜平台用于放置样品,它一般放置在一个5~100μl的小空间内,用一个打孔的塑料垫圈放置于两个玻璃片之间构成。温度控制通过冷却或加热设备实现,或者通过商品化的温度恒定的样品室罩在显微镜外面。
实验板
很多情况下,荧光发射连到显微镜的下端口。这需要用一个带有环形开口的和显微镜低口匹配的实验板把显微镜提升30 cm,还需要光学台上4个支脚。
发射模块
离开显微镜的荧光通过下部开口到检测模块(图5—4)。在显微镜的下部开口之后,一个针孔位于镜头的焦面上(这是桶形镜头,焦距的长度从制造商得到。通常,焦点接近显微镜的下部开口)。针孔就位于xy方向的定位器上并带有一个微米尺,用来定位。这对第一次的校准很有用,探测器不需要针孔来校准。
……
展开