5.其他样品的采集与制备 （1）组织匀浆：采用颈椎脱位、断头法、化学物质或药物法处死动物（用于体外代谢试验时，不能用化学品或药物处死动物，以免影响药物代谢酶的活性和含量），快速切下所需组织，加适量水或其他适宜溶剂，洗去多余的血和表面污染物。吸干水分，用剪刀把组织剪碎，进行匀浆，然后在匀浆液中加适宜有机溶剂和／或用酸碱调整溶液pH，以提取药物，经离心除去蛋白质，分取有机层进行后续处理。组织匀浆最好当天使用，否则，应将其冷冻保存。（2）肝微粒体制备：以鼠肝微粒体（rat hepatic microsomes）的制备为例。动物末次给药8h后开始禁食，禁食16h后，将动物断头处死，剖腹，用注射器吸取经冰浴冷却的生理盐水，经胸动脉或门静脉注入肝脏，灌流，除去肝中血液。快速取出肝脏（以下均在4℃以下操作），用冰冷的生理盐水（或0.25mol/L蔗糖溶液）洗净，滤纸吸干水分，称重，加入四倍于肝重量的0.25mol／L冰冷的蔗糖溶液，用剪刀把肝脏剪碎，制成匀浆。于9000r／min低温离心15～20min，取上清液再于19000r／min低温离心20min，分取上清液。根据实验室条件，选择以下任一种方法制敢微粒体。超速离心法：将上述上清液于100000r／min低温离心45min，弃去上清液，在沉淀中加pH7.4的0.Imol/L Tris—缓冲液（含0.15mol／L KC1）混匀，100000r／min低温离心30min后，沉淀用冰冷的0.25mol/L蔗糖溶液冲洗3次，取沉淀物，加pH7.4的50mmol／L Tris—蔗糖（或0.1mol/L Tris）缓冲液适量制成微粒体悬浮液（使蛋白质浓度约为20mg／mL），测定微粒体悬浮液中蛋白质浓度，于—30℃下保存备用。钙沉淀法：在上述上清液中加入CaCl2溶液，按1mL上清液加0.ImL 88mmol／L CaCl2溶液的比例将两液混合，置冰浴中5min，时而振摇，然后于27000r/min低温离心15～20min，除去上清液，在沉淀物中加入pH7.4的0.1mol／L Tris—缓冲液（含0.15mol／L KCI）混匀，27000r／min低温离心30min后，取沉淀物，加pH7.4的50mmol／L Tris—蔗糖（或0.Imol／LTris）缓冲液适量制成微粒体悬浮液（使蛋白质浓度约为20mg/mL），测定微粒体悬浮液中蛋白质浓度，于—30℃下保存备用。钙沉淀法是利用微粒体能在钙离子作用下聚集成团的原理，采用较低的离心速度获得聚集的微粒体颗粒，无需低温超速离心机。
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