《生物衰老：研究方法与实验方案》详细介绍生物学衰老的前沿研究技术，旨在为读者提供诸多实用、高效且适宜的研究方案，用于研究调控生物学衰老过程的机制及对其的干预方法。书中主要内容分为三部分：①研究衰老过程的基本方法，涵盖基础领域的细胞培养与分选、衰老标志物检测、端粒长度分析和DNA甲基转移酶研究等；②干预衰老过程的技术，包括热量限制及其模拟、营养基因组学、外源端粒酶使用和药物作用评估等；③分析生物衰老的实验方案，如基因的高通量筛选、DNA微阵列技术、消减杂交技术和二维凝胶蛋白质组学等。利用《生物衰老：研究方法与实验方案》综述的各项强大工具，读者可根据研究需要将不同技术紧密结合，从而更好地推进生物学衰老这一新兴综合学科的不断发展。
　　《生物衰老：研究方法与实验方案》可供分子生物学领域、研究衰老相关疾病及其防治药物的医学领域的科研工作者参考使用。

　　《生物衰老：研究方法与实验方案》：
　　6.3方法
　　6.3.1制备细胞提取物
　　下述实验方案是适合贴壁的衰老细胞培养，悬浮生长细胞见注释1。
　　（1）吸弃实验组和对照组细胞培养中的培养基。
　　（2）用预热至37℃的1×PBS冲洗培养瓶底（注释2）。
　　（3）直接向培养瓶底加入一定量的胰蛋白酶—EDTA并在370C下孵育5～6mln（注释2）。
　　（4）用预热至37℃的培养基冲洗培养瓶底，以收集分离的细胞，将培养瓶中的培养基、胰蛋白酶、细胞混合物转移至15 mL锥形管中以备离心（注释2）。
　　（5）离心沉淀细胞并将沉淀在PBS中重悬（注释2）。选择合适方法对细胞进行计数（注释3）。
　　（6）将1×106～3×106个细胞置于1.5mL管中，离心沉淀细胞。除去管中全部PBS。细胞沉淀可—80℃冻存备用。
　　6.3.2细胞裂解和均质化
　　（1）将10μLβ—巯基乙醇加入1mL RLT缓冲液中，制备细胞裂解缓冲液。
　　（2）如6.3.1节中所述轻弹管壁以分散细胞沉淀，然后吸取350 μL新制的细胞裂解缓冲液加入到6.3.1节中获得的细胞沉淀中。很重要的一点是要对沉淀进行大量分散破坏以达到完全裂解。
　　（3）均质化：吸取细胞裂解物至装有QIAshredder的2 mL收集管中，并在微量离心机中以最大速度离心2 min。
　　6.3.3RNA提取
　　由于RNA不稳定，以下实验操作要迅速，每个步骤之间不能有过长停顿。不建议同时从多于6～7个样品中提取RNA。
　　（1）向已均质化处理的细胞裂解物中加入350 μL 70%乙醇，吹吸彻底混匀，上下吹吸混合物至少10次。将全部样品（700 μL）加到RNeasy微型离心柱上，8000 g离心30 s。
　　（2）弃去收集管中的液体并加入700 μL的缓冲液RW1到同一个离心柱，8000 g离心30 s。
　　（3）将RNcasy柱转移到一个新收集管上，弃去步骤（3）所用的装有流动相的管。
　　（4）将4体积100%乙醇加入1体积RPE浓缩液中制备RPE缓冲液。加入500 μL制备好的RPE缓冲液至RNeasy柱，8000 g离心30 s。
　　（5）弃去收集管中的液体，再加入500 μL制备好的RPE至RNeasy柱，8000 g离心2 min。
　　……

致谢
序
前言
原作者及其单位
第1章 生物学衰老的研究技术
第2章 衰老细胞培养：方法与观察
第3章 检测细胞衰老的生物标志物的方法：衰老相关β-半乳糖苷酶检测
第4章 分选年轻与衰老细胞的方法
第5章 端粒长度分析
第6章 体外老化体系中检测DNA甲基转移酶1基因转录的方法
第7章 在体外老化系统中研究DNA甲基转移酶表达的方法
第8章 酿酒酵母的寿命研究
第9章 酵母细胞的热量限制与寿命检测
第10章 使用果蝇进行营养基因组学和寿命研究的方法：高蔗糖／棕榈酸／大豆／牛肉饮食的作用
第11章 热量限制模拟：一种生物老年学研究中的新方法
第12章 使用外源性端粒酶延长细胞寿命
第13章 使用确定的遗传因素诱导细胞衰老
第14章 氧化应激诱导细胞衰老的方法
第15章 衰老研究中的核移植方法
第16章 细胞衰老研究中核酶的利用
第17章 评估药物对小鼠衰老和寿命的影响
第18章 使用高通量筛选系统确定延长寿命的基因
第19章 老年学研究中DNA微阵列技术的应用
第20章 在高等生物中检测和分析fncZ报告位点——在小鼠和果蝇中的应用
第2l章细胞衰老研究中的消减杂交技术
第22章 定位影响果蝇寿命自然差异的遗传多态性
第23章 在老化系统中定位数量性状位点（QTL）
第24章 二维凝胶蛋白质组学：一种研究生物样本中衰老相关的蛋白质丰度或异构体复杂度差异的方法
第25章 衰老与热量限制研究中的代谢组学
索引