第一章 反向遗传学概述<br> 第四节 反向遗传学研究的方法<br> 病毒的反向遗传学研究系统建立后,人们可以根据不同的研究目标,采用不同的研究技术开展研究,比较常用的方法有以下几种。<br> 一、基因突变<br> 基因突变是通过改变基因组中特定序列,从而使其相应的表型发生改变,根据对功能的不同影响,来确定基因的功能及其他遗传因素特性。DNA突变可以是单个碱基发生改变,也可以是多个碱基发生改变。DNA突变技术多用于研究病毒基因组的结构与功能,也可以研究病毒的受体。例如,Leippert等在口蹄疫病毒(Foot-and—mouthdisease virus,FMDV)基因组的RGD序列内部及其附近区段分别制造了13个点突变,然后观察这些突变对病毒感染性的影响,结果证明FMDV的RGD序列在病毒吸附过程中具有重要作用。<br> 二、基因重组<br> 当两种以上病毒感染同一种宿主细胞时,会发生遗传物质一一核酸片段的交换,称为基因重组。其结果是产生稳定的新基因组合的子代,它们具有两亲代所没有的特性。自然界中,这种变异对病毒的进化是有利的。在实验室里,我们也可以人为地对病毒基因组进行重组,拯救出一种新病毒,观察其表型的变化及其与基因型改变的关系。利用这种方法,可以进行基因组结构与功能研究,病毒的致病性研究及新型疫苗研究等。例如,Subbarao等利用8质粒病毒拯救系统,以6+2的基因重排方式获得了毒力减弱的H5N1型重组A型流行性感冒病毒,将其制备成灭活疫苗并免疫小鼠,可刺激试验动物产生较强的免疫应答,能抵抗野生型H5N1病毒的侵袭。
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