一、地高辛原位杂交技术与免疫组织化学双标技术地高辛原位杂交技术和免疫组化技术都可在组织、细胞原位检测基因表达。所不同的是,免疫组化检测的是组织、细胞内的抗原/蛋白成分,即在蛋白水平观察基因的表达;地高辛原位杂交检测的则是DNA或RNA,即在核酸水平观察基因的表达。将这两种方法联合应用即派生出地高辛原位杂交与免疫组织化学双标技术,利用该技术可在同一细胞中显示出某种mlRNA或相应的蛋白、多肽及其他抗原;既能提示细胞内是否存在特定的基因或该基因转录的tuRNA。又能证明是否存在由该基因指导下合成的蛋白质,从而可更好地了解某一基因的转录和蛋白、多肽合成的动力学,为进一步深入探讨细胞遗传信息的表达提供了方便。与单一地高辛原位杂交技术或单一免疫组化技术相比,地高辛原位杂交与免疫组织化学双标技术可用于分析同一细胞,克服了相邻切片上分别做原位杂交和免疫组化所产生的空间误差和样本误差。此技术同样可用于石蜡切片、细胞培养标本及涂片标本。因此,具有很大的应用潜力。<br> 地高辛原位杂交与免疫组织化学双标技术最突出的优点是,能够对某种基因在组织细胞内的分布进行精确定位。将该技术与其他能够对基因表达进行定量分析的技术如Westelnblotting相结合,人们可了解并掌握与各种疾病具有密切联系的因子在疾病发生发展过程中的表达变化规律及表达变化水平,这些因子可能对疾病的发生发展起促进作用(即有害因子),也可能对疾病的发生发展起抑制作用(即有益因子),从而为人类揭示疾病的本质、探明与疾病发展有关的各种因素之间的内在联系提供可能,并由此寻找到攻克疾病、改善病理状态的有效线索及方法。另一方面,当人们已经明确某种因子对于某种疾病是有害因素时,若通过该技术检测发现某种外源性物质(如药物等)能够有效阻止或抑制这种有害因子在该疾病发展过程中的基因表达,则提示这种外源性物质可能对治疗该疾病有效,反之亦然。可见,该技术的应用也为人们对药物或治疗方法进行初步筛选甄别提供了可能。<br> 二、地高辛原位杂交技术在FISH技术中的应用<br> FISH技术,即荧光原位杂交技术,在基因定位、基因图谱的绘制以及染色体结构的分析中发挥着极为重要的作用。在FISH技术中,一个重要的环节是对探针进行有效的标记。FISH探针标记的质量直接影响着对杂交体的荧光检测效果。目前,FISH探针的标记分为直接标记和间接标记两种。直接标记法是将探针直接连上各种荧光分子而得,这种方法虽然较简便、快速、干扰背景也较小,但杂交信号弱,因而不够灵敏。为了获得较好的FISH杂交信号,增加FISH技术的灵敏度,人们用地高辛等中间分子标记探针(即间接标记法),然后用该探针与靶DNA先进行原位杂交后,再用与该地高辛等中间分子的亲和物或抗体偶联的荧光分子进行检测,这样可放大被检测信号,增加FISH技术的敏感性。
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