5.5 电化学检测技术
前面我们讨论了捕获抗体在固相载体上的各种固定方法,然后根据所采用的免疫分析模式形成免疫复合物,接下来就需要一种检测方法来定量检测待测物。电化学检测由于其自身的优点常用于生物传感器研究。这些优点包括:电化学转换的高灵敏性、易与现代微型化/微加工技术兼容、较低的能源需求、经济、不受样品的浊度及颜色的影响等。在免疫分析及免疫传感器中,由于大多数抗体和抗原本身没有氧化还原活性,所以需要在免疫复合物的特殊位置进行标记,来引发化学反应,产生的电化学信号用于定量检测样品中的待测物。电化学检测技术根据信号的类型可分为电位法、电流法、伏安法以及最近发展的电化学阻抗检测,常用于免疫分析体系及免疫传感器。下面介绍这四种检测方法的基本原理,并对该领域近期工作中遇到的一些特殊问题进行讨论。
5.5.1 电位型免疫传感器
电位型免疫传感器是基于测量抗体、抗原免疫反应后指示剂与参比电极之间的电位变化来进行免疫分析的。迄今为止,有关基于电位检测的免疫传感器的研究报道较少。该检测方法一个主要的缺点就是抗体一抗原发生免疫分析后电位变化不大。而且,样品基底的干扰会使这种小的信号变化难以准确检测,所以电位型传感器的可靠性及灵敏性较差。最近有文献报道了一种电位型免疫传感器,在聚吡咯修饰的丝网印刷电极表面检测酶标免疫复合物。首先在含有吡咯单体和十二烷基硫酸钠的溶液中,进行循环伏安扫描至少4次,形成电聚合膜修饰电极;然后在电极上加一恒电位使聚吡咯膜达到其最终状态。所形成的聚吡咯膜修饰电极在37℃时可以保存4个月,而且显示良好的灵敏性。
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