买验一抗原的制备
【实验目的和要求】
熟悉颗粒性抗原、可溶性抗原及半抗原的制备方法和基本思路。
【实验原理】
能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答,并能与相应免疫应答产物,即抗体和致敏淋巴细胞,在体内外发生特异性反应的物质称为抗原或免疫原。前一种性能称为免疫原性,后一种性能称为反应原性。凡是具有这两种性质的物质称为完全抗原,如大多数蛋白质、细菌、病毒等。只具备反应原性而无免疫原性的物质称为半抗原或不完全抗原,如大多数多糖、类脂和某些药物。抗原按其来源可分为外源性抗原和内源性抗原,外源性抗原又可分为天然抗原、人工抗原、合成抗原与基因工程重组抗原。绝大多数天然抗原不是单一成分,在制备抗体时可按需要进行纯化。将半抗原或合成肽通过与载体蛋白连接制备成的具有免疫原性的化合物,分别称为人工抗原和合成抗原。
抗原的制备包括完全抗原的制备和人工抗原的制备,主要用于制造免疫用疫苗或进行抗体的检测。针对不同的抗原特性可以选择不同的制备方法。抗原的制备工作涉及物理学、化学和生理学等许多领域的知识。根据物理或化学特性建立起来的分离、纯化方法的主要原理不外乎2个方面:①利用混合物中几个组分分配率的差别将它们分配到可用机械方法分离的2个或几个物相中,如盐析、有机溶剂抽提、层析和结晶等;②把混合物置于单一物相中,通过物理力场的作用使各组分分配于不同的区域而达到分离的目的,如电泳、超速离心和超滤等。由于组织细胞内存在着许多分子结构和理化性质不同的抗原物质,其分离方法也不一样,就是同一类大分子物质,因选材不同,所使用的方法也有很大差别。因此很难有一个通用的标准方法供提取所有生物活性物质使用,所以在提取前必须针对所欲提取的物质,充分查阅文献资料,选用合适的方法。如果要提取一个结构及性质未知的抗原物质,更需要经过各种方法的比较探索,才能找到一些工作规律和获得预期的效果。
下面仅以点带面地介绍一些常用抗原的制备过程。
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