**部分纏物解剖实验
实验1光学显微镜的构造和使用
【实验目的】
1.了解光学显微镜的构造和功能。
2.掌握显微镜的使用方法。
【实验材料】1.永久制片
洋葱根尖永久切片。
2.新鲜材料
蒲公英花、种子等。
【器材和试剂】1.器材
光学显微镜、体视显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滤纸、擦镜纸。
2.试剂
（1）香柏油。
（2）乙醚。
（3）无水乙醇。
【实验内容与步骤】1.光学显微镜的构造和使用方法
1）构造
光学显微镜的种类很多，但基本构造相同（图1-1），由机械部分和光学部分组成。
（1）机械部分：包括镜座、镜臂、镜筒、焦距调节（粗调节和细调节）螺旋、载物台（镜台）五部分。
镜座：是显微镜基部的底座，起支持及固定镜体的作用。
镜臂：拿取显微镜时手握之处，上接镜筒，下接镜柱。
镜筒：与镜臂相连的、中空的圆形长筒，上接目镜，下接物镜转换器。镜筒的作用是保护成像的光路。
焦距调节螺旋：分粗调节螺旋与细调节螺旋。粗调节螺旋为镜柱上的两个大旋钮，用于较大幅度地升降载物台，以调节物镜与标本之间的距离，从而获得合适的焦距；细调节螺旋在粗调节螺旋的轴心，用以更精细地调节焦距，使用时，一般旋转不可超过一周。若遇到细调节螺旋向前方（或后方）不能旋转时，可向相反方向转动细调节螺旋数圈，然后重新用粗调节螺旋调整后，再微调细调节螺旋。
载物台（镜台）：是承载标本的方形平台，中央有一圆孔，称为通光孔，便于通过光线。载物台后侧有一标本移动器调节螺旋，是移动标本的机械装置，可使标本向前后、左右移动，用以调整标本的位置。
图1-1光学显微镜结构图
（2）光学部分：是构成显微镜的主要部分，由成像系统与照明系统组成。成像系统包括物镜和目镜，照明系统包括聚光器和反光镜。
物镜：位于镜筒的下方，可通过物镜转换器调换不同放大倍数的物镜；物镜的主要作用是将被观察的物体形成一个清晰、放大的实像，以供目镜进一步放大。由于接近被观察的物体，因此也被称为接物镜。物镜是决定显微镜质量的*重要部件，通常由多个透镜组合而成，嵌于金属筒内，这些透镜经过精密的设计和制造，以克服单个透镜的成像缺陷，从而提高成像质量。物镜的设计考虑到了光学原理和人眼的视觉特性，以确保观测的清晰度和舒适度。物镜的放大倍数是一个重要参数，通常以“X”表示，放大倍数刻在物镜金属筒上（如4X、10X、20X、40X、100X），习惯上把放大倍数10X以下的物镜称为低倍物镜，放大倍数40X至55X的物镜称为高倍物镜。此外还有油浸物镜（简称油镜），放大倍数为100X。物镜的金属筒越长，镜头与标本间的距离越近，焦距越短，放大倍数越大。
目镜：位于镜筒的上端，也被称为接目镜或观测镜。目镜的主要作用是将物镜所形成的实像进行放大，以供人眼观测。它由两块透镜组成（其中之一常附有一个指针，用
于指示观察的目标物），常备有几个倍数不同的目镜（5X、10X、20X），根据需要可以更换使用，放大倍数刻在目镜金属筒上，目镜越长，放大倍数越小。观察者的视力对显微镜的使用有重要影响，如果观察者的视力不佳，可能会导致观察到的图像不清晰。在这种情况下，可以通过调整目镜的视度圈来校正视力差异，使图像变得清晰。
聚光器：位于载物台下方的中央部分，由数个透镜组成，其作用是聚集光线，使射入镜筒的光线增强以提高标本的亮度。聚光器可用调节螺旋进行上下调节，以得到适宜亮度：聚光器下降，亮度降低；反之，亮度增加。聚光器的下面附有虹彩光圈，上有操纵杆，利用操纵杆可调节光的强弱。
光源：显微镜的成像质量与照明光源有密切联系，照明光源可分为人工光源和天然光源。显微镜自带的人工光源安装在显微镜的镜座里，由一个灯泡和一组棱镜组成。灯泡发出的光经一组棱镜折射后，先后经过聚光器、通光孔、标本（玻片、切片等）、物镜、镜筒、目镜等，*后到达观察者的眼睛。镜座的侧面有一个光源开关和一个光强调节螺旋，镜座的通光孔处安装有一个金属圈，必要时，可以将黄色或蓝色等滤光玻片放于其中，以改变光源灯的色调（一般不使用）。人工光源还包括非显微镜自带的光源，如显微镜灯、日光灯或台灯。天然光源通常指太阳光。在使用显微镜灯、日光灯、台灯和太阳光作光源时，需要安装反光镜，且不能同时使用显微镜自带的人工光源。
反光镜：位于聚光器下方，含有旋转轴结构用来调节入射光的角度，使光源经反射进入聚光器。反射镜分为平凹两面，其中，凹面镜有聚光作用，多在弱光或有障碍物的环境中使用；平面镜无聚光作用，所反射光线均匀，因此，多在强光环境中使用。当使用显微镜自带的人工光源时，可将反光镜取下。
2）成像原理
光学显微镜是利用光学的成像原理来放大标本的结构特征。*先光射到聚光器上汇集成束，穿过标本后进入到物镜的透镜上；物镜将标本上的结构特征作**次放大，此时结构特征为倒立的实像；这一倒立的实像经过目镜第二次放大，成为倒立的虚像；用眼睛观察到的标本的结构特征为经过两次放大后的倒立虚像。
3）使用方法
光学显微镜的使用包括光线的调节和焦距的调节，具体步骤如下。
（1）光学显微镜的转移和放置：从镜箱内取出显微镜时要用右手紧握镜臂，左手托住镜座并保持平衡状态，切勿只用一只手提取，以免目镜掉落或与它物相碰。显微镜取出后，将其放在离桌边3～4cm处的左前方，左手绘图者与此相反。
（2）光源调节：一般情况下用显微镜自带的人工光源。使用其他光源时，需装上反光镜以调节光强度。对光时须用低倍物镜对着通光孔，一边通过目镜观察视野的明亮度，一边调节反光镜使视野中的颜色均匀且明亮。
（3）低倍物镜的使用：使用显微镜观察标本时（如洋葱根尖永久切片），须先在低倍物镜下找到需观察的部位。低倍物镜使用步骤如下：*先，把标本或观察物（切片、涂片等）放在载物台上，用标本夹卡住标本，使用标本移动器调节螺旋将标本中的目标
结构对准通光孔中央；然后，用眼睛从侧面看物镜，调节低倍物镜与标本的距离至大约5mm;接下来，眼睛通过目镜观察目标结构，同时用粗调节螺旋使镜筒慢慢上升，直到能清楚地看到目标结构为止，随后还可通过轻微转动细调节螺旋以得到更清晰的物像。用显微镜观察标本时，一定要两眼睁开，以减少眼睛疲劳。
（4）高倍物镜的使用：当在低倍物镜下不能对较小物体或细微结构进行较清晰地观察时，需增加物镜的倍数，换高倍物镜观察。步骤如下：*先，在低倍物镜下找到目标结构并将其移至视野中心位置；然后小心地转动物镜转换器，换低倍物镜为高倍物镜；*后，旋转细调节螺旋直至视野中的物像清晰为止。
（5）油镜的使用：当高倍物镜不能满足观察需要时可换成油镜观察，具体方法如下：*先，在高倍物镜下找到目标结构，并将目标结构移至视野的中心位置；然后，在盖玻片上加1滴香柏油，并小心地转动物镜转换器，换高倍物镜为油镜（100X）;随后慢慢抬升载物台，将油镜镜头浸入油滴中，从侧面观察，使油镜镜头几乎与标本接触为止。接下来，眼睛通过目镜观察目标结构，同时通过轻微转动细调节螺旋以得到清晰物像。
香柏油干燥后不易擦净，且易损坏镜头，因此，油镜使用完毕，须立即将镜头上的香柏油擦净。具体方法：用棉棒或镜头纸蘸少许乙醚与无水乙醇的混合液（7:3）擦净镜头。虽然二甲苯也可将香柏油擦拭干净，但它会溶解固定镜头用的胶，长期使用将造成镜片脱落，因此，尽量避免使用二甲苯擦拭显微镜镜头。
（6）显微镜使用完毕后，关闭电源，将各个部分回归原样。具体步骤：旋转粗调节螺旋，使载物台下降，取下标本；转动物镜转换器，使两物镜镜头之间的位置正对通光孔；然后，旋转粗调节螺旋，使载物台上升；*后，右手紧握镜臂，左手托住镜座将显微镜置于镜箱中。
2.体视显微镜的构造和使用方法
体视显微镜是一种具有正像立体感的显微镜，其倍率变化是由改变镜组之间的距离而获得的，因此又称为“连续变倍体视显微镜”。
1）构造
如图1-2所示，体视显微镜也可以分为机械部分和光学部分。
（1）机械部分：包括镜座、立柱、升降调焦旋钮、承物台等部分。
（2）光学部分：由成像系统与照明系统组成。成像系统包括目镜、棱镜组和物镜。
2）基本原理
标本或被观察物（如蒲公英花、种子等）无须加工制作，直接放在镜头下配合照明即可观察，像是直立的，便于操作和解剖。视场直径大，但观察物放大倍率在200倍以下。体视显微镜的特点如下：双目镜筒中的左右两光束不是平行的，而是具有一定的夹角（体视角一般为12～15。）（图1-3）在目镜下方的棱镜把像倒转过来，因此成像具有三维立体感；虽然放大倍数不如光学显微镜，但其工作距离很长、焦深大、视场直径大，便于观察标本的三维立体层次与表面细节。
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