本书主要研究了山新杨的NAC转录因子PdbNAC17的表达模式、在盐胁迫及次生细胞壁形成中的功能及其分子机制。第1章介绍了盐胁迫对植物的危害及植物响应盐胁迫的机制，并概述了NAC转录因子在植物生长发育及响应生物和非生物胁迫中的作用及其调控机制；第2章研究了PdbNAC17转录因子的组织表达特异性和在盐胁迫下的表达模式，并分析其作为转录因子的亚细胞定位情况；第3章通过构建PdbNAC17基因的过表达和敲除载体，研究该基因在山新杨耐盐和次生壁形成中的功能；第4章研究了PdbNAC17转录因子的转录激活结构域，并通过酵母双杂交获得与其互作的同源蛋白；第5章通过RNA-seq技术研究了PdbNAC17转录因子在盐胁迫和次生壁形成中调控的差异表达基因；第6章通过转录因子为中心的酵母单杂交以及酵母单杂交和染色质免疫共沉淀等技术研究了PdbNAC17转录因子结合的顺式作用元件。

第1章 绪论
1.1 盐胁迫对植物的危害
1.2 植物响应盐胁迫的机制
1.3 NAC转录因子的研究进展
1.3.1 NAC转录因子简介
1.3.2 NAC转录因子的功能分析
1.3.3 NAC转录因子的耐盐调控机制
1.3.4 次生壁生长相关NAC转录因子的调控机制
1.4 研究目的及意义
第2章 山新杨PdbNAC17基因的表达分析和亚细胞定位
2.1 实验材料
2.1.1 植物材料
2.1.2 药品及培养基的配制
2.2 实验方法
2.2.1 山新杨的培养
2.2.2 PdbNAC17基因在山新杨不同组织部位中的表达分析
2.2.3 PdbNAC17基因在盐胁迫处理山新杨中的表达分析
2.2.4 PdbNAC17的亚细胞定位分析
2.3 结果与分析
2.3.1 PdbNAC17基因在山新杨不同组织中的表达分析
2.3.2 PdbNAC17基因在盐胁迫处理山新杨中的表达分析
2.3.3 山新杨pBI121-PdbNAC17-GFP表达载体的构建
2.3.4 PdbNAC17的亚细胞定位分析
2.4 讨论
2.4.1 PdbNAC17基因的表达分析
2.4.2 PdbNAC17转录因子的亚细胞定位
2.5 本章小结
第3章 山新杨PdbNAC17基因的功能研究
3.1 实验材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 菌种及载体
3.1.3 药品及培养基配制
3.2 实验方法
3.2.1 山新杨PdbNAC17基因的过表达载体构建
3.2.2 山新杨PdbNAC17基因编辑载体的构建
3.2.3 山新杨PdbNAC17基因工程菌的制备
3.2.4 山新杨的稳定遗传转化
3.2.5 转基因山新杨株系的鉴定
3.2.6 PdbNAC17基因在该基因过表达山新杨中的表达量分析
3.2.7 PdbNAC17基因编辑测序结果分析
3.2.8 PdbNAC17基因的耐盐能力分析
3.2.9 盐胁迫下抗逆基因在PdbNAC17转基因山新杨中的表达
3.2.10 PdbNAC17基因在山新杨木质部发育中的功能
3.3 结果与分析
3.3.1 山新杨PdbNAC17基因过表达载体构建及工程菌制备
3.3.2 山新杨PdbNAC17基因编辑载体构建及工程菌制备
3.3.3 山新杨抗性苗的获得
3.3.4 转基因株系的鉴定
3.3.5 PdbNAC17基因的耐盐能力分析
3.3.6 盐胁迫下抗逆相关基因在PdbNAC17转基因山新杨中的表达分析
3.3.7 PdbNAC17基因在山新杨木质部发育中的功能分析
3.4 讨论
3.4.1 PdbNAC17基因的耐盐及次生壁形成的功能分析
3.4.2 PdbNAC17基因的耐盐调控机制分析
3.5 本章小结
第4章 山新杨PdbNAC17转录激活结构域的确定及与同源蛋白的互作分析
4.1 实验材料
4.1.1 菌种及载体
4.1.2 药品及培养基的配制
4.2 实验方法
4.2.1 山新杨pGBKT7-PdbNAC17酵母表达载体构建
4.2.2 山新杨PdbNAC17转录激活结构域的确定
4.2.3 山新杨PdbNAC17与同源蛋白的载体构建
4.3 结果与分析
4.3.1 山新杨pGBKT7-PdbNAC17全长及分区段的载体构建
4.3.2 山新杨PdbNAC17转录激活结构域分析
4-3.3 山新杨PdbNAC17与同源蛋白的互作分析
4.4 讨论
4.5 本章小结
第5章 盐胁迫下PdbNAC17转基因山新杨的RNA-seq分析
5.1 实验材料
5.2 实验方法
5.2.1 山新杨苗的处理
5.2.2 数据处理与测序评估
5.2.3 参考基因组的序列比对
5.2.4 差异基因的分析
5.2.5 qRT—PCR方法验证表达谱测序结果
5.3 结果与分析
5.3.1 转录组测序质量评估与参考基因组比对
5.3.2 差异表达基因的分析
5.3.3 差异基因的G0分析
5.3.4 差异基因的COG分析
5.3.5 差异基因的KEGG分析
5.3.6 qRT-PCR方法验证表达谱测序结果
5.3.7 差异基因的聚类分析
5.4 本章讨论
5.5 本章小结
第6章 山新杨PdbNAC17识别顺式作用元件的研究
6.1 实验材料
6.1.1 菌种及载体
6.1.2 药品的配制
6.1.3 培养基的配制
6.2 实验方法
6.2.1 山新杨pGADT7-Rec2-PdbNAC17效应载体的构建
6.2.2 PdbNAC17与随机元件库的酵母单杂交分析
6.2.3 未知元件核心序列的确定
6.2.4 未知元件核心序列的突变分析
6.2.5 山新杨PdbNAC17-Flag的过表达载体构建
6.2.6 山新杨PdbNAC17-Flag基因工程茵的制备
6.2.7 山新杨的稳定遗传转化
6.2.8 转基因山新杨株系的鉴定
6.2.9 PdbNAC17基因在过表达转基因山新杨中的表达量分析
6.2.10 ChIP验证
6.3 结果与分析
6.3.1 山新杨pGADT7-Rec2-PdbNAC17载体构建
6.3.2 PdbNACJ7与随机元件库的酵母单杂交
6.3.3 未知元件核心序列的获得
6.3.4 pGADT7-Rec2-PdbNAC17与pHIS2-DNA的互作验证
6.3.5 PdbNAC17与顺式作用元件的互作验证
6.3.6 山新杨PdbNAC17基因过表达载体的构建及工程菌的制备
6.3.7 山新杨抗性苗的获得与鉴定
6.3.8 ChIP-PCR结果
6.4 讨论
6.5 本章小结
参考文献