环境内分泌干扰物（EDCs）不仅影响野生动物的健康，更重要的是危害到了人类的健康。很大一部分环境内分泌干扰物最终都进入到了水环境中，对水生生物的生殖、内分泌等系统造成损伤。本书采用组织学方法观察了稀有鮈鲫成鱼暴露BPA、MT和EE2后精巢和卵巢的发育情况。研究结果显示，EE2和MT暴露稀有鮈鲫7、14和21天后均对精巢和卵巢的发育产生了显著的抑制作用，严重阻碍了精子和卵母细胞的成熟，而BPA暴露稀有鮈鲫7天的时候未发现其对精巢和卵巢造成可见的组织学影响。

1 相关研究进展
1.1 环境内分泌干扰物
1.1.1 EDCs的作用机制
1.1.2 环境内分泌干扰物的危害
1.1.3 17α-甲基睾酮（MT）和乙炔雌二醇（EE2）概述
1.2 EDCs对水生生物性腺及类固醇激素的影响
1.3 类固醇激素合成相关酶类及其基因
1.4 EDCs对水生生物性腺及脂质代谢的影响
1.5 酶联免疫吸附测定法
1.5.1 双抗体夹心法
1.5.2 双抗原夹心法
1.5.3 间接法测抗体
1.5.4 竞争法测抗体
1.5.5 竞争法测抗原
1.5.6 捕获包被法
1.5.7 ABS-ELISA
1.6 数字基因表达谱测序
1.6.1 数字基因表达谱测序原理
1.6.2 数字基因表达谱测序优点
1.6.3 数字基因表达谱测序步骤
1.7 水环境中毒性试验材料
1.7.1 稀有鮈鲫（Gobiocypris rarus）生活习性与分布
1.7.2 稀有鮈鲫作为毒性试验材料具有的优点
1.8 研究的目的与意义
2 类固醇激素合成相关基因的克隆、序列分析及其表达
2.1 实验材料
2.1.1 稀有鮈鲫
2.1.2 实验试剂
2.1.3 实验仪器
2.1.4 主要实验溶液及配制
2.2 实验方法
2.2.1 类固醇合成相关酶类基因全长cDNA的克隆
2.2.2 测序结果的生物信息学分析
2.2.3 实时荧光定量PCR引物的设计与合成
2.2.4 qRT-PCR检测稀有鮈鲫类固醇合成相关基因的组织表达特异性
2.3 结果与分析
2.3.1 总RNA的提取及检测
2.3.2 稀有鮈鲫StAR、cypllal、3β-HSD、cyp17al和11β-HSD2基因cDNA全长的克隆
2.3.3 稀有鮈鲫类固醇合成相关基因cDNA全长的序列结构分析
2.3.4 组织分布
2.4 讨论
2.5 小结
3 17α-甲基睾酮和乙炔雌二醇对稀有鮈鲫肝脏vtg2、类固醇合成相关基因mRNA表达以及性腺发育的影响
3.1 实验材料
3.1.1 实验动物
3.1.2 仪器和药品
3.2 实验方法
3.2.1 MT和EE2暴露稀有鮈鲫
3.2.2 生物学指标测量
3.2.3 组织切片的制备与观察
3.2.4 总RNA的提取、检测和反转录
3.2.5 内参基因的筛选
3.2.6 实时荧光定量PCR
3.2.7 数据分析
3.3 实验结果
3.3.1 MT和EE2对稀有鮈鲫生长发育的影响
3.3.2 EE2暴露对稀有鮈鲫性腺的影响
3.3.3 MT暴露对稀有鮈鲫性腺的影响
3.3.4 内参基因筛选
3.3.5 MT和EE2暴露后肝脏vig2基因的表达变化
3.3.6 EE2和MT暴露稀有夠卿7d、14d和21d类固醇合成相关基因的表达变化
3.4 讨论
3.4.1 MT和EE2对稀有鮈鲫生物学指标和性腺发育的影响
3.4.2 MT和EE2对稀有鮈鲫肝脏vig2的影响
3.4.3 MT和EE2对稀有鮈鲫性腺类固醇合成相关基因mRNA表达的影响
3.5 小结
4 17α-甲基睾酮对稀有鮈鲫体内激素水平的影响
4.1 实验材料
4.1.1 实验动物
4.1.2 实验试剂
4.1.3 实验仪器
4.2 实验方法
4.2.1 MT暴露稀有鮈鲫
4.2.2 样品采集
4.2.3 全鱼匀浆液的准备
4.2.4 蛋白定量
4.2.5 标准曲线的制作
4.2.6 间接酶联免疫（ELISA）方法测定全鱼E2、T和11-KT含量
4.2.7 数据分析
4.3 实验结果
4.3.1 ELISA标准曲线
4.3.2 MT对稀有夠娜体内激素含量的影响
4.4 讨论
5 高通量测序分析MT对稀有鮈鲫性腺转录组的影响
5.1 实验材料
5.1.1 稀有鮈鲫
5.1.2 实验试剂
5.1.3 实验仪器
5.1.4 实验溶剂及配制
5.2 实验方法
5.2.1 MT暴露稀有鮈鲫
5.2.2 总RNA的提取
5.2.3 总RNA质量检测
5.2.4 稀有鮈鲫性腺cDNA文库的构建、检测及测序
5.2.5 数据分析
5.3 实验结果
5.3.1 性腺总RNA质量检测
5.3.2 性腺基因表达谱数据
5.3.3 DGE序列分布规律
5.3.4 差异基因筛选
5.3.5 MT诱导下性腺差异基因GO通路分析
5.3.6 MT诱导下性腺差异基因KEGG通路分析
5.3.7 实验重复性分析
5.3.8 qRT-PCR验证
5.4 讨论
5.4.1 稀有鲍螂卵母细胞成熟信号通路中的差异基因
5.4.2 其他差异基因
5.5 小结
参考文献
缩略语
附录1 实验中所需的实验试剂
附录2 实验中所需的实验仪器
附录3 主要实验所需要的溶液及其配制
附录4 Trizol一步法提取总RNA
附录5 1%和2%浓度（m/v）琼脂糖凝胶的配制
附录6 反转录（DNA第一链合成）
附录7 天泽基因公司DNA凝胶回收与纯化试剂盒中的操作步骤
附录8 感受态细胞的制备
附录9 3'RACE System for Rapid Amplification of cDNA Ends（Invitrogen）说明书
附录10 5'RACE System for Rapid Amplification of cDNA Ends（Invitrogen）说明书
附录11 实时定量PCR 引物设计原则
附录12 载玻片和盖玻片的清洗
附录13 组织切片制备过程中的染色
附录14 鱼雌二醇（E2）酶联免疫分析
附录15 鱼睾酮（T）酶联