内容总览
总论
一、分子生物学技术
二、分子医学的内容
三、分子医学的社会、伦理问题
四、分子医学在现代医学发展中的意义
第一篇 核酸实验技术
第一章 核酸的制备
第一节 基因组DNA的提取与纯化
一、基因组DNA提取的基本过程
二、基因组DNA提取的基本策略
三、苯酚-氯仿抽提法提取基因组DNA的实验方案
四、Chelex-100法提取基因组DNA的实验方案
第二节 RNA的提取和cDNA合成
一、RNA提取和cDNA合成的基本概念
二、RNA提取的基本策略
三、cDNA合成的基本策略
四、RNA提取和cDNA合成的实验方案
第二章 聚合酶链反应
第一节 聚合酶链反应的基本原理
一、PCR的基本概念
二、PCR技术的基本原理
第二节 常用PCR技术的实验策略
一、PCR技术的主要类型
二、基础PCR技术的实验方案
三、RT-PCR技术的实验策略
四、PCR实验的影响因素及讨论
五、PCR常见问题及异常结果的分析
第三节 实时荧光定量PCR
一、实时荧光定量PCR技术的基本概念
二、实时荧光定量PCR技术的基本原理和策略
三、实时荧光定量PCR技术的实验方案
第三章 核酸的检测
第一节 DNA的凝胶电泳检测
一、电泳的基本概念
二、琼脂糖凝胶电泳的原理和基本策略
三、聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA
第二节 分光光度分析法
一、分光光度分析法的原理
二、分光光度法检测DNA含量
三、分光光度法检测RNA浓度
第四章 核酸杂交与核酸探针
第一节 核酸杂交与核酸探针的基本原理
一、核酸杂交与核酸探针的基本概念
二、常用的核酸杂交方法
三、核酸探针的种类
四、核酸探针的标记物
第二节 核酸探针的合成与标记
一、双链DNA探针
二、单链DNA探针
三、RNA探针
第三节 杂交常规实验
一、原位杂交法进行重组质粒的筛选
二、Southern杂交
三、Northern杂交
第五章 基因克隆
第一节 目的基因的获取和基因载体的制备
一、目的基因获取的基本策略
二、基因载体的基本概念
三、质粒载体的制备
第二节 切割目的基因和基因载体
一、限制性内切酶的基本概念
二、酶切反应的体系和基本策略
三、酶切反应的实验方案
第三节 目的基因和载体的体外连接
一、目的基因和载体重组的基本策略
二、目的基因和载体连接的工具酶
三、目的基因和载体连接的实验方案
四、注意事项及常见问题分析
第四节 重组DNA转化宿主细胞
一、转化的基本概念
二、转化实验的基本策略
三、原核细胞转化的实验方案
四、真核细胞转染的实验方案
第五节 重组体阳性克隆的筛选
一、阳性克隆筛选的基本策略
二、重组质粒转化大肠埃希菌及蓝白筛选的实验方案
三、真核转染细胞筛选的实验方案
第六节 外源基因在宿主细胞中的表达
一、概论
二、宿主细胞
三、表达载体
四、提高目的基因表达水平的基本策略
五、表达产物检测的基本策略
六、表达蛋白质的分离纯化
七、基因表达的实验方案
第二篇 蛋白质实验技术
第六章 蛋白质样品的制备
第一节 样品的处理
一、原材料的选择和预处理
二、细胞破碎的实验策略
第二节 蛋白质的提取和纯化
一、蛋白质提取的实验策略
二、蛋白质分离纯化的实验策略
三、蛋白质浓缩、干燥和保存的实验策略
第七章 蛋白质定量检测技术
第一节 紫外吸收测定法
第二节 Folin-酚试剂法
第三节 考马斯亮蓝法
第四节 二喹啉甲酸检测法
第八章 蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
第一节 SDS-PAGE的原理和基本策略
一、聚丙烯酰胺凝胶的制备
二、SDS-PAGE分离蛋白质
第二节 SDS-PAGE分离蛋白质的实验方案
一、SDS-PAGE的实验方案
二、用考马斯亮蓝对SDS-聚丙烯酰胺凝胶进行染色的实验方案
三、用银盐对SDS-聚丙烯酰胺凝胶进行染色的实验方案
四、SDS-聚丙烯酰胺凝胶的干燥
五、注意事项及常见问题分析
第九章 蛋白质的免疫印迹技术
第一节 免疫印迹技术的基本原理
第二节 免疫印迹技术的基本策略
一、蛋白质的SDS-PAGE
二、蛋白质从凝胶转移至膜
三、印迹膜的蛋白染色
四、印迹膜的免疫检测
五、免疫印迹后膜的重复使用
六、注意事项及常见问题分析
第十章 蛋白质层析技术
第一节 层析的基本理论和基本操作
一、层析的基本概念
二、塔板理论
三、层析
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