1 绪论
1.1 秀丽隐杆线虫
1.2 内质网应激反应
1.2.1 IRE
1.2.2 PERK
1.2.3 ATF
1.2.4 秀丽隐杆线虫的内质网应激反应
1.3 DAF-16／FOXO
1.3.1 DAF-16
1.3.2 FOXO
1.4 CREBH／LET-607
1.4.1 CREBH
1.4.2 LET-607
1.5 磷脂酰胆碱
1.6 立题依据及研究意义
1.6.1 立题依据
1.6.2 研究意义
2 材料与方法
2.1 秀丽隐杆线虫品系及其培养条件
2.2 实验室用水
2.3 秀丽隐杆线虫生长培养基的制备
2.4 OP50-1菌株和RNA干扰菌株培养皿的制备
2.5 LB培养基
2.6 M9缓冲液（M9 Buffer）
2.7 S缓冲液（S Buffer）
2.8 秀丽隐杆线虫基因组提取液（2X Lysis Buffer）
2.9 PBS缓冲液（PBS Buffer）
2.10 Haira's溶液（Hajra's Solution）
2.11 10％TritonTM X-100溶液
2.12 50xTAE电泳缓冲液
2.13 尼罗红（Nile Red）染料
2.14 油红O（Oil-Red-O）染料
2.15 秀丽隐杆线虫脂肪尼罗红染料染色
2.16 秀丽隐杆线虫脂肪油红O染料染色
2.17 秀丽隐杆线虫脂肪油红O染料染色定量
2.18 大肠杆菌感受态细胞的制备
2.19 秀丽隐杆线虫基因组提取
2.20 秀丽隐杆线虫冷冻保存与复苏
2.2 l秀丽隐杆线虫拍照
2.22 秀丽隐杆线虫体长测量实验
2.23 秀丽隐杆线虫同步化处理
2.24 秀丽隐杆线虫RNA提取
2.25 第一链cDNA合成
2.26 荧光定量PCR（QPCR）
2.27 转录组测序
2.28 ChIP-seq分析
2.29 气相色谱串联质谱分析法（GC-MS／MS）
2.30 脂肪酸分析
2.31 薄层色谱法（TLC）
2.32 秀丽隐杆线虫应激实验
2.32.1 绿脓杆菌感染实验
2.32.2 活性氧应激实验
2.32.3 热应激实验
2.32.4 内质网应激实验
2.33 秀丽隐杆线虫寿命实验
2.34 秀丽隐杆线虫产卵量分析
2.35 let-607p::GFP::let-607转基因线虫构建
2.35.1 构建let-607p::let-607载体
2.35.2 构建let-607p::GFP::let-607载体
3.35.3 显微注射
2.35.4 整合let-607p::GFP::let-607载体到线虫基因组
2.36 化合物补充实验
2.36.1 神经酰胺
2.36.2 磷脂酰胆碱
2.36.3 离子霉素
2.36.4 1-油酰基-2-乙酰基-sn-甘油
2.36.5 氯化胆碱
2.36.6 地昔帕明
2.37 数据量化和统计分析
2.38 主要仪器
3 结果
3.1 LET-607对秀丽隐杆线虫应激反应的影响
3.1.1 LET-607对线虫先天免疫的影响
3.1.2 LET-607对线虫抵抗外界压力的影响
3.1.3 秀丽隐杆线虫LET-607的细胞定位
3.2 LET-607通过DAF-16调控线虫抗压能力和寿命
3.2.1 LET-607对基因表达的影响
3.2.2 LET-607通过调节DAF-16入核来激活其功能
3.2.3 LET-607通过DAF-16调节抗压力
3.2.4 LET-607激活DAF-16有助于增加线虫寿命
3.2.5 已知的CREBH调控因子不参与LET-607对DAF-16的调控
3.3 LET-607调控线虫磷脂酰胆碱代谢
3.3.1 LET-607对线虫脂肪累积的影响
3.3.2 LET-607对线虫脂肪酸的影响
3.3.3 酸性鞘磷脂酶ASM-3不介导DAF-16激活
3.3 _4鞘磷脂合酶SMS-5介导DAF-16激活
3.3.5 磷脂酰胆碱介导DAF-16激活
3.3.6 LET-607调控磷脂酰胆碱代谢
3.3.7 PC介导生殖细胞缺失型突变体中的DAF-16激活
3.4 LET-607通过钙离子信号调控DAF-16
3.4.1 ITR-1钙离子通道对DAF-16激活的影响
3.4.2 钙离子流对DAF-16激活的影响
3.4.3 PKC-2和SGK-1参与LET-607介导的DAF-16激活
4 讨论
参考文献
附录
F.1 QPCR引物
F.2 ChIP-seq结果
F.3 病原菌感染实验统计结果
F.4 活性氧应激实验统计结果
F.5 热应激实验统计结果
F.6 内质网应激实验统计结果
F.7 寿命实验统计结果
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