本书介绍了天然橡胶生物合成机制、排胶过程活性氧产生和清除、橡胶树转录调控等方面的研究进展。并就如下技术在橡胶树排胶机制研究中的应用进行详细的指导：植物转录因子分析，橡胶树基因克隆、生物信息学分析和表达分析，橡胶树胶乳酵母单、双杂交cDNA文库构建，转录因子抗体制备和检测，转录因子Pulldown分析，ChiP-seq鉴定转录因子靶基因，采用酵母单杂交筛选调控转录因子，BiFC检测技术验证蛋白互作，转基因技术验证转录因子功能酵母双杂交技术证明蛋白互作技术，亚细胞定位技术，橡胶树树皮线粒体提取及相关生理参数测定，橡胶树树皮蛋白质样品的制备及LC-MS分析，橡胶树排胶差异品种的代谢组分析。本书可供以橡胶树等热带、亚热带果树为研究对象的科研院所和高校科研人员、教师和研究生参考。

上篇 排胶理论基础
第一章 天然橡胶生物合成机制研究进展
一、植物中异戊二烯合成路径
二、橡胶粒子在天然橡胶合成中的作用
三、线粒体为橡胶烃合成和胶乳再生提供物质和能量保障
四、天然橡胶合成机理研究重要进展——橡胶转移酶及其复合体
五、基于巴西橡胶树橡胶粒子离体天然橡胶合成体系
六、人工橡胶粒子构建取得重要进展
七、展望
第二章 排胶过程活性氧产生和清除研究进展
一、死皮引起橡胶树树皮结构与蛋白组成变化
二、橡胶树死皮发生相关假说
三、死皮防控技术
四、死皮诱导的水分和活性氧机制模型
五、展望
第三章 橡胶树转录调控研究进展
一、转录调控的原理简介
二、橡胶生物合成中的转录调控
三、植物MYB转录因子的研究进展
四、植物MYB44转录因子研究进展
五、MYB44转录因子在橡胶树抗逆研究中的展望
下篇 技术指南
第四章 转录因子分析方法及其在橡胶树排胶机制研究中的应用
一、转录因子结构与功能简介
二、生物信息学分析
三、转录因子发现与鉴定方法
四、互作蛋白与DNA筛选鉴定
五、蛋白质互作的研究方法
六、转基因功能验证
七、转录调控技术在橡胶树排胶功能研究中的展望
第五章 橡胶树MYB转录因子克隆、生物信息学和表达分析
一、橡胶树HbMYBs基因成员结构分析
二、材料处理方法
三、实验方法
四、结果与分析
五、讨论
第六章 橡胶树胶乳均一化酵母双杂交cDNA文库构建
一、材料与方法
二、结果与分析
三、讨论
第七章 抗体制备检测与Western检测
一、HblMYC3研究背景
二、橡胶树HbIMYC3多克隆抗体制备和检测
三、Western蛋白检测
第八章 ABA信号途径bZIP转录因子的Pull-down分析
一、ABA的抗逆功能
二、GST Pull-down证明体内蛋白互作
第九章 ChiP-seq鉴定转录因子目标基因
一、橡胶树光照样品的处理
二、ChIP免疫沉淀实验
三、ChIP文库构建流程
四、信息分析流程
五、数据过滤质控
六、与参考序列比对
七、Peak分析
八、Peak注释
第十章 转录因子蛋白互作分析方法
一、HbSRPP1基因克隆与分析检测
二、HbSRPPI菌落PCR检测和阳性克隆鉴定
三、酵母表达载体构建
四、天然橡胶合成关键酶酵母表达载体构建
五、基于酵母双杂交验证橡胶生物合成关键酶互作
六、BiFC技术验证蛋白互作
七、萤火素酶实验验证蛋白互作
第十一章 转基因拟南芥技术验证转录因子功能
一、遗传转化拟南芥验证基因功能
二、HbMYB44转基因拟南芥的功能验证
第十二章 转录因子亚细胞定位分析
一、融合表达载体构建
二、HbMYB44亚细胞定位
第十三章 橡胶树树皮线粒体提取及相关生理参数测定
一、橡胶树线粒体提取及纯化
二、线粒体活性相关生理参数测定
三、橡胶树树皮电镜样品制备与超微结构观察
第十四章 橡胶树树皮及胶乳中亚细胞组分蛋白质的提取及LC-MS分析
一、蛋白提取方法
二、蛋白质的胰蛋白酶水解
三、用于质谱数据检索的蛋白质数据库的准备及其他数据处理
四、蛋白质的免疫学验证
第十五章 橡胶树胶乳代谢组分析
一、橡胶树材料处理
二、胶乳c乳清样品制备
三、数据分析
四、差异代谢物的筛选
五、差异代谢物分析
参考文献
附录1 载体和菌株
附录2 生化试剂及实验仪器
附录3 培养基配制
附录4 试剂配制及物品准备
附录5 缩略语
项目资助