作为宿主范围决定因子的细胞凋亡影响了杆状病毒杀虫剂在生物防治中的应用,本书针对杆状病毒诱导细胞凋亡内容进行介绍,共分为6章。第1章介绍杆状病毒诱导的细胞凋亡及RNAi技术,对杆状病毒诱导细胞凋亡在实践应用中的重要意义和以往研究背景进行介绍;第2章介绍Splt-iap4和Splt-p49基因转录和翻译研究;第3章介绍应用RNAi技术研究Splt-iap4和Splt-p49基因功能,结果表明Splt-P49具有抑制细胞凋亡的作用,而Splt-IAP4对细胞有聚集作用;第4章介绍Splt-iap4和Splt-p49 瞬时表达及抗细胞凋亡活性研究,Splt-P49能够抑制vAcAnh感染诱导的Sf9细胞的凋亡并能恢复病毒的复制,但Splt-IAP4不能;第5章介绍杆状病毒与抗凋亡基因的进化关系研究;第6章介绍SpltNPV感染诱导Se301细胞凋亡的检测与分析,SpltNPV的感染可导致Se301细胞出现明显的早期凋亡症状,但不能进行到凋亡的最后阶段,说明早期细胞凋亡仍然是限制病毒完成复制周期的重要因素。
第1章 杆状病毒诱导的细胞凋亡及RNAi技术
1.1 核多角体病毒
1.2 杆状病毒感染与宿主的关系
1.3 杆状病毒宿主专一性
1.4 细胞凋亡概念及其形态学特征
1.5 细胞凋亡与细胞坏死的区别
1.6 细胞凋亡的分子机制
1.7 杆状病毒感染引起的细胞凋亡研究
1.8 抗凋亡基因
1.8.1 p35基因
1.8.2 p49基因
1.8.3 iap基因
1.9 RNAi技术
1.9.1 RNAi的发现与发展
1.9.2 RNAi作用机制
1.9.3 RNAi机制中的主要成员
1.9.4 用RNAi方法研究特定基因功能的技术路线
第2章 Splt-iap4、Splt-p49的基因转录和翻译研究
2.1 材料与方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 结果与分析
2.2.1 Splt-iap4转录时相
2.2.2 Splt-p49转录时相
2.2.3 Splt-iap4表达时相
2.2.4 Splt-p49表达时相
2.3 讨论
2.4 小结
第3章 应用RNAi技术研究Splt-iap4和Splt-p49基因功能
3.1 材料与方法
3.1.1 材料
3.1.2 方法
3.2 结果
3.2.1 Splt-iap4和Splt-p49基因的PCR扩增结果
3.2.2 对照cat基因的PCR扩增结果
3.2.3 重组质粒p28i-p49和p28i-iap4的酶切鉴定
3.2.4 重组质粒p28i-cat的酶切鉴定
3.2.5 Splt-P49和Splt-IAP4凋亡功能检测
3.2.6 Splt-IAP4蛋白没有协同抗凋亡作用
3.2.7 Splt-IAP4对细胞有聚集作用
3.2.8 Splt-iap4 dsRNA处理对产生感染性病毒粒子的影响
3.2.9 RNAi对SpltNPV感染SpLi-221细胞的影响
3.3 讨论
3.4 小结
第4章 Splt-iap4和Splt-p49瞬时表达及抗细胞凋亡活性研究
4.1 材料与方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 结果与分析
4.2.1 瞬时表达载体的构建
4.2.2 瞬时表达蛋白检测
4.2.3 Splt-IAP4和Splt-P49抗凋亡活性检测
4.3 讨论
4.4 小结
第5章 杆状病毒与抗凋亡基因的进化关系研究
5.1 材料与方法
5.1.1 材料
5.1.2 方法
5.2 结果与分析
5.2.1 43株杆状病毒全基因组特征
5.2.2 43株杆状病毒全基因组中的抗凋亡基因
5.2.3 iap的序列比对和进化分析
5.3 讨论
5.4 小结
第6章 SpltNPV感染诱导Se301细胞凋亡的检测与分析
6.1 材料与方法
6.1.1 材料
6.1.2 方法
6.2 结果与分析
6.2.1 光学显微镜观察SpltNPV感染Se301细胞的形态学变化
6.2.2 电子显微镜观察SpltNPV感染Se301细胞的形态学变化
6.2.3 DAPI染色
6.2.4 台盼蓝(trypan blue)染色
6.2.5 DNA ladder
6.2.6 滴度测定
6.2.7 dot blotting
6.2.8 RT-PCR
6.2.9 SDS-PAGE和western blotting分析
6.3 讨论
6.4 小结
总结
参考文献
缩略词