《海洋生物及制品微生物检测实用手册》主要介绍海洋生物及制品的微生物检测实验室的要求，包括了微生物实验室的设计，微生物实验室的生物安全、设备，国外检验标准及限量标准，抽样的方法等及海洋生物及制品微生物检基础知识，检测的方法，包括细菌，真菌，病毒，及其各类的传统方法和先进的检测方法。

　　（一）生物安全柜
　　生物安全柜（Biological Safety Cabinet，BSC）是为操作原代培养物、菌毒株及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。当操作液体或半流体，例如摇动、倾注、搅拌，或将液体滴加到固体表面上或另一种液体中时，均有可能产生气溶胶，在对琼脂平板划线接种、用移液管接种细胞培养瓶、采用多道加样器将感染性试剂的混悬液转移到微量培养板中、对感染性物质进行匀浆及涡旋振荡、对感染性液体进行离心以及进行动物操作时，这些操作都可能产生感染性气溶胶。由于肉眼无法看到直径小于5μm的气溶胶以及直径为5～100μ的微小液滴，因此实验室工作人员通常意识不到有这样大小的颗粒在生成，并可能吸入或交叉污染工作台面的其他材料。正确使用生物安全柜可以有效减少由于气溶胶暴露所造成的实验室感染以及培养物交叉污染。生物安全柜同时也能保护环境。
　　目前国际上通常将生物安全柜分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ个不同等级。I级生物安全柜能够保护操作人员和周围环境，但不能切实保护操作对象（样本），因此I级生物安全柜不能用于食品微生物检验的无菌操作。Ⅱ级生物安全柜在设计上不但能提供个体防护，而且能保护工作台面的物品不受房间空气的污染，其有四种不同的类型（A1型、A2型、B1型和B2型），可用来操作危险度Ⅱ级和Ⅲ级的感染性物质。Ⅲ级生物安全柜则可提供更高级别的生物安全保护。
　　生物安全柜的使用要点是：
　　（1）生物安全柜使用者应熟知生物安全柜的使用方法和局限性。
　　（2）生物安全柜运行正常时才能使用。
　　（3）生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。在使用生物安全柜时应穿着个体防护服。
　　（4）生物安全柜内应尽量少放置器材或标本，不能影响后部压力排风系统的气流循环。Ⅱ级生物安全柜前面的进气格栅不能被纸、仪器、设备或其他物品阻挡。所有物品应尽可能地放在工作台后部靠近工作台后缘的位置，并使其在操作中不会阻挡后部格栅。可产生气溶胶的设备（例如混匀器、离心机等）应靠近生物安全柜的后部放置。像装有生物危害性的废弃物袋、盛放废弃移液管的盘子以及吸滤瓶等体积较大的物品，应该放在生物安全柜内的某一侧。
　　（5）放人生物安全柜内的物品应采用70%酒精来清除表面污染。可以在消毒剂浸湿的毛巾上进行实验，以吸收可能溅出的液滴。
　　（6）耐高压灭菌的生物危害性废弃物袋以及移液管盛放盘不应放在生物安全柜的外面，否则在使用这些物品时双臂就必须频繁进出生物安全柜，这样会干扰生物安全柜空气屏障的完整性，从而影响对人员和物品的防护。
　　（7）在工作台面上的实验操作应该按照从清洁区到污染区的方向进行。
　　（8）在生物安全柜内所形成的几乎没有微生物的环境中，应避免使用煤气、酒精灯等明火，使用明火会对气流产生影响，并且在处理挥发性物品和易燃物品时，也易造成危险。允许使用电热式接种环灭菌器，但最好使用一次性无菌接种环。
　　（9）所有工作必须在工作台面的中后部进行，并能够通过玻璃观察挡板看到。
　　（10）尽量减少操作者身后的人员活动。
　　（11）操作者在移动双臂进出生物安全柜时，需要小心维持前面开口处气流的完整性，双臂应该垂直地缓慢进出前面的开口。手和双臂伸入到生物安全柜中等待大约Imin，以使生物安全柜调整完毕并且让里面的空气“扫过”手和双臂的表面以后，才可以开始对物品进行处理。要在开始实验之前将所有必需的物品置于生物安全柜内，以尽可能减少双臂进出前面开口的次数。
　　（12）在实验结束时，包括仪器、设备、剩余培养基在内的生物安全柜里内所有物品都应清除表面污染，并移出生物安全柜。在每次使用前后，工作台面和内壁要用消毒剂擦拭消毒。可用漂白剂溶液或70%酒精进行消毒，在使用如漂白剂等腐蚀性消毒剂后，还必须用无菌水再次进行擦拭。
　　（13）在生物安全柜内的工作开始前和结束后，生物安全柜的风机应至少运行5min来完成“净化”的过程。如果使用频率很高时，推荐将生物安全柜一直维持运行状态。
　　（14）在生物安全柜内操作时，不能进行文字工作。
　　（15）一旦在生物安全柜中发生有生物学危害的物品溢出时，应在生物安全柜处于工作状态下立即进行清理。要使用有效的消毒剂，并在处理过程中尽可能减少气溶胶的生成。所有接触溢出物品的材料都要进行消毒和（或）高压灭菌。
　　（16）生物安全柜的所有维修工作应该由有资质的专业人员来进行。在生物安全柜操作中出现的任何故障都应该报告，并应在再次使用之前进行维修。在生物安全柜安装时以及使用后，每年应由有资质的专业人员对生物安全柜防护效果（包括对生物安全柜的完整性、HEPA过滤器的泄漏、向下气流的速度、正面气流的速度、负压（换气次数）、气流的烟雾模式以及警报和互锁系统）进行测试。
　　（17）生物安全柜在移动以及更换过滤器之前，必须清除污染。最常用的方法是采用甲醛蒸气熏蒸。
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第一章 概述
第一节 海洋生物制品定义和分类
一、海洋生物制品定义
二、海洋生物制品分类
第二节 海洋生物制品微生物学特性
一、海洋生物制品微生物学安全性
二、海洋生物制品主要致病性微生物种类
三、海洋生物制品微生物的主要来源
四、海洋生物制品微生物的控制规范

第二章 海洋生物制品微生物检测实验室的质量管理
第一节 海洋生物制品微生物检测实验室的质量控制要求
一、管理要求
二、技术要求
三、过程控制要求
四、内部质量控制和外部质量评估
第二节 海洋生物制品微生物实验室仪器设备的校准、维护和性能确认
一、仪器设备的校准
二、微生物检测实验室常用仪器设备的校准、维护和性能确认
三、微生物检测实验室仪器的验证
第三节 微生物实验室的生物安全管理
一、微生物实验室生物安全
二、生物安全实验室安全设备
三、微生物实验安全措施

第三章 海洋生物制品样品的收集和制备
第一节 取样的原理和方案
一、取样的原理
二、取样的方案
第二节 取样的方法
一、基本取样的要求
二、取样工具
三、常用取样方法
第三节 样品的制备
一、样品制备常用的器具
二、前处理
三、混合和均质
四、稀释液的制备

第四章 海洋生物制品微生物的检测
第一节 主要微生物检测项目及其限量
一、海洋生物制品中主要致病菌
二、国外海洋生物制品微生物检测项目及限量要求
第二节 病原菌的检测
一、病原菌检测的一般方法
二、沙门氏菌检测
三、霍乱弧菌
四、副溶血性弧菌
五、单核细胞增生李斯特菌
六、出血性大肠杆菌0157：H7
七、金黄色葡萄球菌
八、亚硫酸盐还原厌氧菌
九、志贺氏菌
十、罐头食品商业无菌
第三节 卫生指示菌检测
一、卫生指示菌的概念及选择原理
二、海洋生物制品中卫生指示菌
三、菌落总数检测
四、肠球菌检测
五、大肠杆菌、大肠菌群、粪大肠菌群
六、金黄色葡萄球计数
七、霉菌酵母菌计数
第四节 海洋生物制品主要病毒检测技术
一、海洋生物制品中病毒检测技术概述
二、海洋生物制品中病毒常用检测技术
三、海洋生物制品中急性胃肠炎病毒及其检测
四、水产食品中甲型肝炎病毒（Hepatitis Avirus）及其检验
五、海洋生物制品中肠道病毒及其检测

附录A 实验常用培养基配置成分
附录B 食品生产经营过程中微生物控制指导原则
附录C 消毒效果监测
参考文献